{"id":67053,"date":"2023-10-21T18:32:38","date_gmt":"2023-10-21T21:32:38","guid":{"rendered":"https:\/\/blogmed.antonini.psc.br\/?p=66"},"modified":"2023-10-21T18:32:38","modified_gmt":"2023-10-21T21:32:38","slug":"acido-5-hidroxi-3-indol-acetico","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/antonini.ddns.net\/?p=67053","title":{"rendered":"\u00c1cido 5-hidroxi-3-indol-ac\u00e9tico"},"content":{"rendered":"<p><strong>Caracter\u00edsticas qu\u00edmicas<\/strong><br \/>\n<!--more--><\/p>\n<ul>\n<li style=\"text-align: justify;\">Peso Molecular: <b>191,19 daltons<\/b><\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">F\u00f3rmula Molecular: <b>C<sub>10<\/sub>H<sub>9<\/sub>NO<sub>3<\/sub>.<\/b><\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Classe Qu\u00edmica: <b>\u00c1cido carboxil\u00edco derivado do INDOL.<\/b><\/li>\n<\/ul>\n<p><b> <img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"aligncenter size-full wp-image-79\" src=\"https:\/\/blogmed.antonini.psc.br\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/5-hiaa.png\" alt=\"\" width=\"223\" height=\"138\"\/><\/b><\/p>\n<p align=\"CENTER\">&nbsp;<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\" align=\"JUSTIFY\">O 5-HIAA \u00e9 um metab\u00f3lito da serotonina. A serotonina \u00e9 sintetizada a partir da dexcarboxila\u00e7\u00e3o do L-triptofano, um amino\u00e1cido essencial, conforme a rea\u00e7\u00e3o:<\/p>\n<p align=\"JUSTIFY\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"aligncenter wp-image-80 size-full\" src=\"https:\/\/blogmed.antonini.psc.br\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/5-Hiaa1.gif\" alt=\"\" width=\"528\" height=\"144\"\/><\/p>\n<p align=\"CENTER\">&nbsp;<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\" align=\"JUSTIFY\">Quando termina sua a\u00e7\u00e3o, a serotonina \u00e9 oxidada (na realidade ela \u00e9 <b>desaminada<\/b>) pela enzima monoamino-oxidase (MAO), que retira o grupamento NH<sub>4<\/sub><sup>+<\/sup> transformando-a em<br \/>\n5-hidroxi-3-indol-ac\u00e9tico, conforme a rea\u00e7\u00e3o abaixo:<\/p>\n<p align=\"JUSTIFY\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"aligncenter wp-image-82\" src=\"https:\/\/blogmed.antonini.psc.br\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/5-Hiaa6.gif\" alt=\"\" width=\"560\" height=\"190\"\/><\/p>\n<p align=\"CENTER\">&nbsp;<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">O grupo de alcal\u00f3ides que cont\u00e9m o n\u00facleo do indol ou derivados na sua estrutura consiste de compostos isolados de diversas drogas de diversas fam\u00edlias de vegetais como <b>ergot, rauvolfia, fava-de-calabar, noz v\u00f4mica, vinca,<\/b> entre outros. \u00c9 o maior grupo de alcal\u00f3ides com as mais importantes e diversificadas estruturas e usos terap\u00eauticos. S\u00e3o derivados do <b>triptofano<\/b> ou do seu derivado descarboxilado, a <b>triptamina<\/b>. Estas bases cont\u00eam dois \u00e1tomos de nitrog\u00eanio e s\u00e3o classificados em oito grupos distintos. Um grande n\u00famero desses alcal\u00f3ides s\u00e3o derivados da condensa\u00e7\u00e3o da triptamina com uma por\u00e7\u00e3o monoterp\u00eanica derivada da <b>secologanina <\/b>fornecendo uma s\u00e9rie de compostos como os alcal\u00f3ides <b>antileuc\u00eamicos <\/b>da <b><i>Catharanthus roseus,<\/i> vincristina e vimblastina.<\/b><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong>P<span style=\"font-family: Arial;\">esquisa e Identifica\u00e7\u00e3o de Alcal\u00f3ides Ind\u00f3licos.<\/span><\/strong><b><\/b><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">&nbsp;<em><strong><span style=\"font-family: Arial;\"> Pesquisa<\/span><\/strong><\/em><\/p>\n<ol style=\"text-align: justify;\">\n<li style=\"text-align: justify;\">Ferver cerca de 1g do f\u00e1rmaco em p\u00f3 ou fragmentado com 10ml de H<sub>2<\/sub>SO<sub>4 <\/sub>\u00e0 1%, por dois minutos;<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Deixar em repouso por alguns minutos e filtrar por algod\u00e3o;<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Resfriar o filtrado e alcalinizar com NH<sub>4<\/sub>OH dilu\u00edda at\u00e9 pH 9-10;<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Adicionar 7ml de CHCl<sub>3<\/sub> e proceder a extra\u00e7\u00e3o;<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Decantar a camada clorof\u00f3rmica para tr\u00eas c\u00e1psulas de porcelana e evaporar em banho-maria at\u00e9 secura.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Executar as rea\u00e7\u00f5es de identifica\u00e7\u00e3o.<\/li>\n<\/ol>\n<p style=\"text-align: justify;\"><a name=\"_Toc446237475\"><\/a><em><strong>Rea\u00e7\u00e3o de Otto<\/strong><\/em><\/p>\n<ul style=\"text-align: justify;\">\n<li style=\"text-align: justify;\">Ao res\u00edduo da c\u00e1psula adicionar uma gota de H<sub>2<\/sub>SO<sub>4 <\/sub>concentrado e triturar com bast\u00e3o;<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Adicionar cristais de bicromato de pot\u00e1ssio;<\/li>\n<\/ul>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong><i>Resultado<\/i><\/strong><b><i>: <\/i>A rea\u00e7\u00e3o \u00e9 positiva para detectar presen\u00e7a de alcal\u00f3ides ind\u00f3licos se apresentar colora\u00e7\u00e3o inicialmente viol\u00e1cea que passa a vermelha.<\/b><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong><em><a name=\"_Toc446237476\"><\/a>Rea\u00e7\u00e3o de Mandelin<\/em><\/strong><\/p>\n<ul style=\"text-align: justify;\">\n<li>Ao res\u00edduo da c\u00e1psula adicionar uma gota do <b>Reativo de Mandelin <\/b>(Vanadato de am\u00f4nio a 1% em \u00e1cido sulf\u00farico concentrado) e triturar com bast\u00e3o:<\/li>\n<\/ul>\n<p style=\"text-align: justify;\">A rea\u00e7\u00e3o \u00e9 positiva para detectar presen\u00e7a de estricnina se apresentar colora\u00e7\u00e3o viol\u00e1cea a viol\u00e1cea-avermelhada.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\"><b><i>&nbsp;<\/i><\/b><strong><em>Rea\u00e7\u00e3o de oxida\u00e7\u00e3o \u00e0 cacotelina<\/em><\/strong><\/p>\n<ul>\n<li style=\"text-align: justify;\">Ao res\u00edduo da c\u00e1psula adicionar uma gota de HNO<sub>3 <\/sub>concentrado e triturar com bast\u00e3o;<\/li>\n<\/ul>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong><i>Resultado<\/i><\/strong><b><i>: <\/i>a rea\u00e7\u00e3o \u00e9 positiva para detectar presen\u00e7a de alcal\u00f3ides metoxilados se apresentar colora\u00e7\u00e3o alaranjada.<\/b><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\"><b><i>&nbsp;<\/i><\/b><strong><em><span style=\"font-family: Arial;\">Preparo do reativo<\/span> \u03b1<span style=\"font-family: Arial;\">-nitroso-<\/span><span style=\"font-family: Symbol;\">b<\/span><span style=\"font-family: Arial;\">-naftol (tamb\u00e9m chamado de 1-nitroso-2-naftol).<\/span><\/em><\/strong><\/p>\n<table width=\"767\" cellspacing=\"1\" cellpadding=\"5\" border=\"\">\n<tbody>\n<tr>\n<td width=\"21%\" valign=\"TOP\"><strong>Reagentes:<\/strong><\/td>\n<td width=\"79%\" valign=\"TOP\">\n<ul>\n<li>10,0g de <span style=\"font-family: Symbol;\">b<\/span><b>-naftol.<\/b><\/li>\n<li><b>&nbsp;<\/b>2,8g de <b>hidroxido de s\u00f3dio.<\/b><\/li>\n<li><b>&nbsp;<\/b>5,0g de <b>nitrito de s\u00f3dio.<\/b><\/li>\n<li><b>&nbsp;<\/b>4,9ml de <b>\u00e1cido sulf\u00farico <\/b>(d = 1,84).<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"21%\" valign=\"TOP\"><b><\/b><strong>Subst\u00e2ncias complementares:<\/strong><\/td>\n<td width=\"79%\" valign=\"TOP\">\n<ul>\n<li>\u00c1gua gelada.<\/li>\n<li><b>Etanol.<\/b><\/li>\n<\/ul>\n<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<p><strong>T\u00e9cnica<\/strong><b>:<\/b><\/p>\n<ol>\n<li style=\"text-align: justify;\">Em becher, dissolver 2,8g de NaOH em 120ml de \u00e1gua fria e, com a solu\u00e7\u00e3o ainda quente, dissolver na mesma, 10g de <span style=\"font-family: Symbol;\">b<\/span>-naftol.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Resfriar externamente a solu\u00e7\u00e3o de <span style=\"font-family: Symbol;\">b<\/span>-naftolato de s\u00f3dio, usando banho de gelo e sal grosso, at\u00e9 obter 0<sup>o<\/sup>C.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Adicionar 5g de NaNO<sub>2<\/sub> e agitar com bast\u00e3o de vidro.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Gotejar lentamente (durante uns 15 minutos), sobre a mistura em agita\u00e7\u00e3o, uma solu\u00e7\u00e3o resfriada de 4,m9ml de \u00e1cido sulf\u00farico em 13ml de \u00e1gua, contida em funil de decanta\u00e7\u00e3o mantendo a temperatura da mistura de rea\u00e7\u00e3o cuidadosamente em torno de 0<sup>o<\/sup>C. Verificar, ao final da adi\u00e7\u00e3o, se a mistura est\u00e1 \u00e1cida com papel de vermelho do congo, e agitar a mistura ainda apor 45 minutos, mantendo a baixa temperatura.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Filtrar o precipitado em b\u00fcchner, e lavar com muita \u00e1gua gelada.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Escorrer bem, lavar com alguns mililitros de \u00e1lcool gelado, escorrer bem e<br \/>\nsecar ao ar ou em dessecador de \u00e1cido sulf\u00farico.<\/li>\n<\/ol>\n<table width=\"767\" cellspacing=\"1\" cellpadding=\"5\" border=\"\">\n<tbody>\n<tr>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\"><b>Constantes f\u00edsicas: <\/b><\/td>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\">\n<ul>\n<li>P.M. = 173,16.<\/li>\n<li>P.F. = 110<sup>o<\/sup>C.<\/li>\n<\/ul>\n<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\"><b><\/b><b>Caracter\u00edsticas organol\u00e9pticas:<\/b><\/td>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\">\n<ul>\n<li style=\"text-align: justify;\">Agulhas amarelas. Solubilidade em \u00e1gua fria 0,02% a 20<sup>o<\/sup>C;<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">em \u00e1lcool et\u00edlico 2,4% \u00e0 13<sup>o<\/sup>C. Sol\u00favel em \u00e1lcool<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">et\u00edlico \u00e0 quente, \u00e9ter et\u00edlico e benzeno.<\/li>\n<\/ul>\n<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<p>&nbsp;<strong>Princ\u00edpios da an\u00e1lise e uso atual<\/strong><\/p>\n<ul>\n<li style=\"text-align: justify;\"><b><i><span style=\"font-family: Arial;\">&nbsp;<\/span><\/i><\/b>A an\u00e1lise qualitativa e quantitativa do \u00e1cido 5-hidroxi-indol ac\u00e9tico, metab\u00f3lito da <b>serotonina<\/b> encontrado na urina, foi descrito em 1955. O ensaio quantitativo, baseado na medi\u00e7\u00e3o da absorb\u00e2ncia a 540nm do crom\u00f3foro do crom\u00f3foro violeta formado quando este \u00e1cido reage com <b>1-nitroso-2-naftol<\/b> em <b>\u00e1cido nitroso<\/b> foi o primeiro m\u00e9todo descrito sendo um dos mais amplamente utilizado. Em uma modifica\u00e7\u00e3o deste, se<br \/>\nmistura <b>2-mercaptoetanol<\/b> ao meio de rea\u00e7\u00e3o para melhorar a especificidade do ensaio. Nesta modifica\u00e7\u00e3o, a absorb\u00e2ncia se mede em <b>590nm.<\/b><\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">A prova qualitativa para o 5-HIAA em urina \u00e9 uma adapta\u00e7\u00e3o do primeiro ensaio quantitativo. Se baseia na rea\u00e7\u00e3o do <b>5-Hidroxiind\u00f3is<\/b> com <b>1-nitroso 2-naftol<\/b> em <b>\u00e1cido nitroso<\/b> e faz-se, atualmente, como foi descrita originalmente.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">No mesmo ano em que se descreveu a metodologia do <b>1-nitroso 2-naftol <\/b>foram publicados determina\u00e7\u00f5es qualitativas e quantitativas deste \u00e1cido em urina empregando o <b>Reativo de Ehrlich<\/b>(<i>p-dimetilamino-benzalde\u00eddo em \u00e1cido clor\u00eddrico dilu\u00eddo)<\/i>. A cor azul produzida pode ser medida com um espectrofot\u00f4metro a 590nm, podendo tamb\u00e9m ser aplicada \u00e0 quantifica\u00e7\u00e3o do 5-HIAA.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">A <b>espectrofluorometria<\/b> tem sido empregada para a determina\u00e7\u00e3o deste \u00e1cido em urina e em l\u00edquido cefalorraquidiano (<b>LCR<\/b>). O procedimento espectrofluorom\u00e9trico implica no isolamento do \u00e1cido por cromatografia em coluna de <b>Sephadex<span style=\"font-family: Symbol;\">\u00d2<\/span> G-10(?)<\/b> ou de resina de troca i\u00f4nica <b>AG-1-X8. <\/b>Logo, mede-se a intensidade da fluoresc\u00eancia diretamente ou depois de uma derivatiza\u00e7\u00e3o com <span style=\"font-family: Symbol;\">o<\/span> <b>-ftalalde\u00eddo.<\/b><\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">A medi\u00e7\u00e3o direta da fluoresc\u00eancia se realiza com excita\u00e7\u00e3o a 295 ou 300nm e emiss\u00e3o a 535 ou 540nm. Se a derivatiza\u00e7\u00e3o for feita antes da medi\u00e7\u00e3o da fluoresc\u00eancia, a excita\u00e7\u00e3o \u00e9 de 360 ou 355nm e a emiss\u00e3o se mede a 475 ou 480nm.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Tamb\u00e9m s\u00e3o conhecidas t\u00e9cnicas cromatogr\u00e1ficas para a determina\u00e7\u00e3o do 5-HIAA. A medi\u00e7\u00e3o em urina se faz por <b>cromatografia g\u00e1s-l\u00edquido<\/b> em uma coluna de silicone, empregando um detetor de condutividade t\u00e9rmica, logo que se d\u00e1 a metila\u00e7\u00e3o com diazometano. Se tem publicado muitos procedimentos por cromatografia l\u00edquida de alta precis\u00e3o (<b>HPLC<\/b>) para a medi\u00e7\u00e3o do 5-HIAA em urina e LCR utilizando uma coluna <b>C<sub>18<\/sub><br \/>\n<\/b>em fase inversa. Em alguns desses m\u00e9todos se emprega a detec\u00e7\u00e3o fluorom\u00e9trica do composto no derivado, enquanto em outros se utiliza a detec\u00e7\u00e3o eletroqu\u00edmica para o \u00e1cido na urina e l\u00edquor.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Tamb\u00e9m se tem aplicado t\u00e9cnicas de radio-imuno-ensaio (RIA) para a medi\u00e7\u00e3o do \u00e1cido 5-hidroxiindolac\u00e9tico em tecidos, sangue, l\u00edquor e l\u00edquidos de perfus\u00e3o.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Em recentes compara\u00e7\u00f5es (atrav\u00e9s de enquetes) para controle de qualidade para urina realizado pelo Col\u00e9gio de Pat\u00f3logos Americanos (CAP), mostrou que mais de 95% dos laborat\u00f3rios participantes empregam alguma forma de m\u00e9todo espectrofotom\u00e9trico com 1-nitroso-2-naftol (ou <span style=\"font-family: Symbol;\">a<\/span>-nitroso-<span style=\"font-family: Symbol;\">b<\/span> -naftol) para a determina\u00e7\u00e3o do 5-HIAA.<\/li>\n<\/ul>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong>M\u00e9todos de refer\u00eancia e de elei\u00e7\u00e3o<\/strong><\/p>\n<ul style=\"text-align: justify;\">\n<li>Para a detec\u00e7\u00e3o qualitativa do 5-HIAA em urina se tem empregado dois m\u00e9todos. A t\u00e9cnica com o 1-nitroso-2-naftol \u00e9 mais espec\u00edfico que o de Ehrlich e se emprega quase exclusivamente. O limite m\u00ednimo para detec\u00e7\u00e3o por prova de 1-nitroso-2-naftol \u00e9 30mg\/l, ou seja, a sensibilidade \u00e9 de 30mg\/l.<\/li>\n<li>A prova utilizando o reativo de Ehrlich em urina tem uma sensibilidade de 12,5mg\/l, mas n\u00e3o \u00e9 espec\u00edfica para 5-HIAA. Outros derivados do <b>indol, <\/b>como <b>5-hidroxitriptamina <\/b>e <b>triptamina<\/b>, reagem de forma semelhante.<\/li>\n<li>A t\u00e9cnica do RIA n\u00e3o tem sido muito utilizada devido a dificuldade de se obter anticorpos e ant\u00edgenos marcados.<\/li>\n<li>O uso da cromatografia em g\u00e1s para a determina\u00e7\u00e3o do 5-HIAA em urina n\u00e3o \u00e9 muito difundida, visto que inclui extra\u00e7\u00f5es extensas e metila\u00e7\u00f5es em um tempo de an\u00e1lise relativamente prolongado.<\/li>\n<li>A detec\u00e7\u00e3o do 5-HIAA em urina e LCR por espectrofotometria ap\u00f3s separa\u00e7\u00e3o em coluna de <b>Sephadex<span style=\"font-family: Symbol;\">\u00d2<\/span> G-10<\/b> \u00e9 considerado espec\u00edfico para este composto e apresenta uma sensibilidade de 50ng e um coeficiente de varia\u00e7\u00e3o de de 4%. A recupera\u00e7\u00e3o \u00e9 de 90 \u00e0 95% e n\u00e3o \u00e9 dif\u00edcil de fazer. No entanto, apesar de suas vantagens aparentes de<br \/>\nsensibilidade e especificidade, este procedimento n\u00e3o se emprega a mi\u00fados.<\/li>\n<li>Tem sido publicados muitos m\u00e9todos de detec\u00e7\u00e3o e quantifica\u00e7\u00e3o por <b>HPLC <\/b>do 5-HIAA em urina e liquor. Estes procedimentos apresentam uma sensibilidade de 25 a 30ng e constituem os m\u00e9todos mais sens\u00edveis. Tamb\u00e9m a vantagem de uma maior especificidade. Muitos compostos que interferem no m\u00e9todo no m\u00e9todo da 1-nitroso-2-naftol, como a <b>serotonina, indol, triptamina, triptofano, \u00e1cido homovanil\u00ednico, <i>p<\/i>-hidroxiacetanilida,<\/b> n\u00e3o interferem na an\u00e1lise por HPLC (cromatografia em g\u00e1s-l\u00edquido).<\/li>\n<li>Lamentavelmente o equipamento utilizado neste tipo de determina\u00e7\u00e3o n\u00e3o se encontra dispon\u00edvel em qualquer laborat\u00f3rio da mesma forma que os requeridos para uma simples detec\u00e7\u00e3o espectrofotom\u00e9trica. Se conhecem in\u00fameras varia\u00e7\u00f5es da t\u00e9cnica do HPLC e n\u00e3o \u00e9 poss\u00edvel indicar qual dos muitos procedimentos ou m\u00e9todo de detec\u00e7\u00e3o \u00e9 o melhor. Contudo, para a an\u00e1lise de l\u00edquidos ou tecidos que contem n\u00edveis baixos de 5-HIAA, a HPLC, especialmente com detec\u00e7\u00e3o eletroqu\u00edmica \u00e9 o m\u00e9todo de elei\u00e7\u00e3o. A HPLC pode ser um m\u00e9todo de refer\u00eancia para outros m\u00e9todos de detec\u00e7\u00e3o deste \u00e1cido.<\/li>\n<li>A an\u00e1lise original por espectrofotometria do 5-HIAA em urina com forma\u00e7\u00e3o de um crom\u00f3foro violeta logo ap\u00f3s a extra\u00e7\u00e3o e rea\u00e7\u00e3o com o <span style=\"font-family: Symbol;\">a<\/span> -nitroso-<span style=\"font-family: Symbol;\">b<\/span> -naftol, ainda \u00e9 o mais usado. Os inconvenientes deste m\u00e9todo incluem um tratamento pr\u00e9vio da urina com <b>dinitrofenilhidrazina<\/b> para que esta reaja com os ceto\u00e1cidos presentes e se elimine a interfer\u00eancia deles, uma dupla extra\u00e7\u00e3o com <b>clorof\u00f3rmio<\/b> se faz necess\u00e1rio para eliminar o <b>\u00e1cido indolac\u00e9tico <\/b>da urina e a interfer\u00eancia devida a diversas subst\u00e2ncias fen\u00f3licas presentes na urina, al\u00e9m de certas drogas. Neste m\u00e9todo a <span style=\"font-family: Symbol;\">r<\/span><b>-hidroxiacetanilida, <\/b>derivada da acetanilida ou drogas relacionadas, reagem de forma similar ao 5-HIAA. O <b>acetaminofeno guaicolato de glicerila, fenacetina, mefenesina<\/b> e<b> metacarbamol<\/b> originam metab\u00f3litos urin\u00e1rios que d\u00e3o rea\u00e7\u00e3o <b>positiva <\/b>com o <span style=\"font-family: Symbol;\">a<\/span><b>-nitroso-<span style=\"font-family: Symbol;\">b<\/span>-naftol<\/b>. Por outro lado, a <b>metenamida, fenotiazinas, proclorperazina <\/b>e <b>prometazina <\/b>inibem o desenvolvimento da cor.<\/li>\n<li>Muitos problemas do m\u00e9todo espectrofotom\u00e9trico original podem ser superados mediante a adi\u00e7\u00e3o de <b>2-mercaptoetanol<\/b> ao <span style=\"font-family: Symbol;\">a<\/span><b>-nitroso-<span style=\"font-family: Symbol;\">b<\/span> -naftol <\/b>e <b>\u00e1cido nitroso <\/b>\u00e0 mistura de rea\u00e7\u00e3o. O mercaptoetanol elimina a interfer\u00eancia dos <b>fen\u00f3is, \u00e1cido indol-3-ac\u00e9tico, mefesina, \u00e1cido homovainil\u00ednico, 5-hidroxitriptamina, <i>p<\/i>-hidroxiacetanilida, \u00e1cido <i>p<\/i>-hidroxifenilac\u00e9tico <\/b>e <b>guaicolato de glicerila.<\/b> Tamb\u00e9m converte o crom\u00f3foro violeta em um tom de cor azul mais intenso.<\/li>\n<li>A compara\u00e7\u00e3o do m\u00e9todo espectrofotom\u00e9trico original e de sua modifica\u00e7\u00e3o com 2-mercaptoetanol com o m\u00e9todo de HPLC que emprega detec\u00e7\u00e3o fluorom\u00e9trica apoia o argumento de que o ensaio n\u00e3o modificado apresenta consider\u00e1veis interfer\u00eancias, as quais n\u00e3o aparecem o m\u00e9todo modificado. A correla\u00e7\u00e3o entre o ensaio espectrofotom\u00e9trico modificado e o de HPLC \u00e9 boa (coeficiente de corre\u00e7\u00e3o = 0,9303, n\u00famero de determina\u00e7\u00f5es, <i>n<\/i> = 44). A linha de regress\u00e3o linear est\u00e1 representada pela equa\u00e7\u00e3o:<\/li>\n<\/ul>\n<p style=\"text-align: center;\" align=\"CENTER\"><strong><span style=\"background-color: #ffff00;\">Ensaio espectrofotom\u00e9trico modificado = 0,85 X ensaio HPLC + 0,11.<\/span><\/strong><\/p>\n<ul>\n<li style=\"text-align: justify;\">As recentes enquetes do CAP indicam que a precis\u00e3o inter-laborat\u00f3rios n\u00e3o \u00e9 muito boa. Para n\u00edveis dentro do intervalo de refer\u00eancia, os coeficientes de varia\u00e7\u00e3o em percentagem (%), inter-laborat\u00f3rios, oscilavam entre 22 e 55%, enquanto que para n\u00edveis mais elevados de 5-HIAA (100 a 200mg\/l), se encontravam entre 9 a 25%. O uso da HPLC automatizada (CG-MS acoplada \u00e0 computador), poderia proporcionar an\u00e1lises mais reprodut\u00edveis.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Dada \u00e1 disponibilidade do equipamento, o m\u00e9todo espectrofotom\u00e9trico modificado com mercaptoetanol \u00e9 provavelmente o m\u00e9todo de elei\u00e7\u00e3o para os laborat\u00f3rios que realizam an\u00e1lises urin\u00e1rias de rotina. Se o laborat\u00f3rio dispuser de um equipamento de HPLC, este ser\u00e1 o m\u00e9todo de escolha.<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong>Amostra<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Uma amostra de urina tomada ao acaso \u00e9 apropriada para a detec\u00e7\u00e3o do 5-HIAA.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Para a an\u00e1lise quantitativa deste \u00e1cido se requer uma amostra de urina de vinte e quatro horas recolhida de um frasco com <b>12g de \u00e1cido b\u00f3rico<\/b> ou <b>10ml de Cl 6M<\/b> (Molar). A amostra \u00e9 est\u00e1vel por uma semana a temperatura ambiente e mais de um m\u00eas a 2-6<sup>o <\/sup>C. Alguns alimentos como a berinjela, a banana, a ameixa, as nozes, os anan\u00e1s, s\u00e3o ricos em serotonina e devem ser suspensos em serotonina e devem ser suspensos tr\u00eas a quatro dias antes da tomada da amostra, pois poder\u00e3o dar falsos resultados positivos.<\/p>\n<p><strong>Procedimento: m\u00e9todo espectrofotom\u00e9trico para o \u00e1cido 5-hidroxi-indol-ac\u00e9tico<\/strong><\/p>\n<p><strong>Princ\u00edpio<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong><em>Prova Qualitativa:<\/em><\/strong> Ao se adicionar <span style=\"font-family: Symbol;\">a<\/span> <b>-nitroso-<span style=\"font-family: Symbol;\">b<\/span> -naftol<\/b> em <b>\u00e1cido nitroso<\/b> na urina, se desenvolve uma cor <b>p\u00farpura<\/b>. espec\u00edfica para os <b>5-hidroxiind\u00f3is.<\/b> Os crom\u00f3genos interferentes podem se extra\u00eddos com <b>dicloro-etileno <\/b>(ou <b>dicloreto de etileno<\/b>).<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong><em>Prova Quantitativa:<\/em><\/strong><\/p>\n<ul>\n<li style=\"text-align: justify;\">o 5-HIAA deve ser extra\u00eddo com <b>\u00e9ter<\/b> da urina acidificada.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Para favorecer a passagem deste \u00e1cido para os solventes org\u00e2nicos se adiciona <b>sal <\/b>(<b>NaCl<\/b>) \u00e0 urina.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">O 5-HIAA \u00e9 recuperado da fase et\u00e9rea por reextra\u00e7\u00e3o com <b>buffer de fosfato (tamp\u00e3o de fosfato) <\/b>\u00e0 pH 7,0.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Os fen\u00f3is urin\u00e1rios n\u00e3o s\u00e3o ionizados em pH 7,0 e permanecem na fra\u00e7\u00e3o et\u00e9rea. Mediante a adi\u00e7\u00e3o do <b>1-nitroso-2-naftol <\/b>em <b>\u00e1cido nitroso <\/b>se obt\u00e9m um crom\u00f3geno <b>violeta <\/b>que por adi\u00e7\u00e3o de <b>2-mercaptoetanol<\/b> se transforma num crom\u00f3geno <b>azul<\/b>.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">O mercaptoetanol reduz os compostos coloridos formados pelo <b>\u00e1cido indolac\u00e9tico <\/b>e pelos <b>fen\u00f3is<\/b>, com exce\u00e7\u00e3o dos derivados de <b>\u00e1cido 5-hidroxiindolac\u00e9tico (5-HIAA)<\/b>, transformados em incolores \u00e0 590nm.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">O tratamento com mercaptoetanol tamb\u00e9m elimina a interfer\u00eancia devida a <b>mefesina <\/b>e ao <b>guaicolato de glicerila.<\/b><\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Ademais, a cor azul produzida pela rea\u00e7\u00e3o do mercaptoetanol com os crom\u00f3genos do 5-HIAA, duplica o coeficiente de extin\u00e7\u00e3o molar com rela\u00e7\u00e3o ao crom\u00f3geno violeta.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">A absorb\u00e2ncia m\u00e1xima para o produto de cor azul se encontra em 645nm. Toda via, esta longitude de onda n\u00e3o obedece \u00e0s <b>Leis de Beer <\/b>ao longo de um intervalo adequado de concentra\u00e7\u00f5es do 5-HIAA. Se obt\u00e9m um intervalo linear mais conveniente a 590nm.<\/li>\n<\/ul>\n<p><strong><em>Reativos<\/em><\/strong><\/p>\n<p><em><strong>Prova qualitativa<\/strong><\/em><\/p>\n<ol>\n<li style=\"text-align: justify;\"><strong><i><span style=\"font-family: Symbol;\">a<\/span> -nitroso-<span style=\"font-family: Symbol;\">b<\/span>-naftol, 1g\/l em etanol \u00e0 95% (5,75mmol\/l).<\/i><\/strong> Dissolver 0,5g de 1-nitroso-2-naftol em etanol \u00e0 95% e completar para 500ml com o mesmo \u00e1lcool. Conservar em frasco \u00e2mbar, em geladeira por no m\u00e1ximo um m\u00eas.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\"><strong><i>\u00c1cido sulf\u00farico 1 mol\/l.<\/i><\/strong> Adicionar 56ml de \u00e1cido sulf\u00farico 17,8mol\/l (95%) a aproximadamente 800ml de \u00e1gua deionizada em um bal\u00e3o volum\u00e9trico de l000ml. Agitar com cuidado e completar o volume para um litro.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\"><strong><i>Nitrito de s\u00f3dio, 25g\/l (0,36mol\/l)<\/i><\/strong>. Preparar uma vez por m\u00eas e conservar entre 2 e 6<sup>o <\/sup>.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\"><strong><i>\u00c1cido nitroso (60mmol\/l)<\/i>.<\/strong> Preparar no momento do uso, adicionando <b>1ml <\/b>da solu\u00e7\u00e3o de <b>nitrito de s\u00f3dio <\/b>em <b>5ml <\/b>de<b> \u00e1cido sulf\u00farico 1mol\/l<\/b>.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\"><strong><i>Dicloreto de etileno.<\/i><\/strong> Redestilar o <b>dicloreto de etileno <\/b><b>P.A.<\/b> ou utilizar o P.A. &#8220;<b>destilado sobre vidro&#8221;.<\/b><\/li>\n<\/ol>\n<p><strong>Prova quantitativa<\/strong><\/p>\n<ul>\n<li style=\"text-align: justify;\"><i><b>\u00c1cido clor\u00eddrico, 1mol\/l.<\/b><\/i> diluir 85ml de <b>HCl <\/b>concentrado a aproximadamente 800ml de \u00e1gua deionizada em um bal\u00e3o volum\u00e9trico de 1000ml. Agitar com cuidado e completar o volume para 1000ml. Est\u00e1vel por dois anos \u00e0 25<sup>o <\/sup>C.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Cloreto de s\u00f3dio P.A.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\"><i><b>\u00c9ter sulf\u00farico.<\/b><\/i> Eliminar os <b>per\u00f3xidos<\/b> do \u00e9ter por agita\u00e7\u00e3o funil de separa\u00e7\u00e3o, com a metade de seu volume de solu\u00e7\u00e3o de <b>sulfato ferroso (59g\/l)<\/b> seguida por lavagens com \u00e1gua deionizada. Preparar somente no momento do uso.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\"><i><b>Buffer de fosfato (tamp\u00e3o fosfato), 0,1mol\/l, pH 7,0. <\/b><\/i>Utilizar <b>2,59g <\/b>de <b>fosfato de pot\u00e1ssio<\/b> (monob\u00e1sico) e <b>8,31g <\/b>de <b>fosfato de s\u00f3dio dib\u00e1sico hepta-hidratado<\/b> ou <b>4,4g <\/b>de <b>fosfato de s\u00f3dio dib\u00e1sico anidro, <\/b>por <b>500ml <\/b>de solu\u00e7\u00e3o. Ajustar o pH segundo a necessidade, utilizado pHmetro. Est\u00e1vel por dois meses \u00e0 2-6<sup>o<\/sup>C.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\"><i><b><span style=\"font-family: Symbol;\">a<\/span> -nitroso-<span style=\"font-family: Symbol;\">b<\/span>-naftol, 2g\/l em etanol a 95% (11,5mmol\/l).<\/b><\/i> Conservar em frasco \u00e2mbar. <b><u>Cuidado: solu\u00e7\u00e3o cancer\u00edgena.<\/u><\/b> O 1-nitroso-2-naftol P.A. \u00e9 adequado para o uso anal\u00edtico embora possa dar um <b>branco <\/b>elevado. \u00c9 poss\u00edvel obter um reativo mais puro<br \/>\ndissolvendo-se 20g deste composto em 100ml de etanol fervente, adicionando carv\u00e3o ativado e filtrando por duas horas em papel Whartman n\u00famero 1. Resfriar a mistura durante 16-18 horas e filtrar o precipitado cristalinopardo em um filtro de B\u00fcchner. Pode ser secado em temperatura ambiente, de prefer\u00eancia ao abrigo da luz. ou em estufa \u00e0 v\u00e1cuo. O rendimento \u00e9 de 10 a 12g.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\"><i><b>Nitrito de s\u00f3dio, 25g\/l (0,36mol\/l).<\/b><\/i> Preparar uma vez por m\u00eas. Conservar entre 2-6<sup>o<\/sup>C.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\"><i><b>\u00c1cido nitroso (0,013mol\/l).<\/b><\/i> Preparar no momento do uso adicionando 1ml da solu\u00e7\u00e3o de nitrito de s\u00f3dio \u00e0 25ml de Hcl 1mol\/l.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\"><i><b>Mercaptoetanol, 250ml\/l (3,57mol\/l).<\/b><\/i> Preparar em capela. Est\u00e1vel por um ano entre 2 e 6<sup>o<\/sup>C.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\"><i><b>Acetato de etila.<\/b><\/i> Redestilar o acetato de etila P.A. ou empregar o qualidade &#8220;destilado sobre vidro&#8221;.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\"><i><b>Solu\u00e7\u00e3o padr\u00e3o de \u00e1cido 5-hidroxiindolac\u00e9tico, 250mg\/l (1,3mmol\/l). <\/b><\/i>Colocar 25mg de \u00e1cido 5-hidr\u00f3xidoindolac\u00e9tico (Sigma Chemical Co. St. Louis, MO.) em um bal\u00e3o volum\u00e9trico de 100ml e dissolvem em 100ml de \u00e1cido clor\u00eddrico 0,1M (Hcl 1mol\/l diluido em 1:10 de \u00e1gua). est\u00e1vel durante um m\u00eas \u00e0 2-6<sup>o<\/sup>C, em frasco \u00e2mbar.<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>Tabela I &#8211; condi\u00e7\u00f5es de rea\u00e7\u00e3o para provas qualitativas de 5-HIAA:<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<table width=\"748\" cellspacing=\"1\" cellpadding=\"5\" border=\"\">\n<tbody>\n<tr>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\"><b><i>Condi\u00e7\u00e3o:<\/i><\/b><\/td>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\"><b><i><\/i><\/b><i><\/i><i><b>Prova qualitativa:<\/b><\/i><\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\">Temperatura<\/td>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\">ambiente<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\">Tempo de rea\u00e7\u00e3o<\/td>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\">5 minutos<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\">Volume de amostra<\/td>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\">0,2ml (200<span style=\"font-family: Symbol;\">m<\/span> l)<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\">Fra\u00e7\u00e3o de volume de amostra<\/td>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\">0,1ml<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\">Concentra\u00e7\u00e3o final do reativo<\/td>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\">1-nitroso-2-naftol: 1,44mmol\/l<\/p>\n<p>HNO<sub>3<\/sub>: 15,0mmol\/l<\/p>\n<p>H<sub>2<\/sub>SO<sub>4<\/sub>: 0,28mol\/l<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\">Sensibilidade<\/td>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\">30mg\/ml<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>M\u00e9todo padr\u00e3o de determina\u00e7\u00e3o do \u00c1cido 5-hidroxiindolac\u00e9tico. 10mg\/l<br \/>\n(52<span style=\"font-family: Symbol;\">m<\/span> mol\/l).<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>Diluir 4,0ml de solu\u00e7\u00e3o padr\u00e3o em 100ml de solu\u00e7\u00e3o aquosa de <b>tiour\u00e9ia<\/b><br \/>\n(1g\/l). Est\u00e1vel por duas semanas \u00e0 2-6<sup>o<\/sup>C em frasco \u00e2mbar.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><a name=\"_Toc446237487\"><\/a>Ensaio<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><a name=\"_Toc446237488\"><\/a>Prova qualitativa<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>1 &#8211; Processar um controle de urina normal como compara\u00e7\u00e3o.<\/p>\n<p>2 &#8211; Pipetar em tubo de ensaio, 0,2ml de urina, 0,8ml de \u00e1gua deionizada e<br \/>\n0,5ml de 1-nitroso-2-naftol e agitar para completa mistura.<\/p>\n<p>3 &#8211; Adicionar 0,5ml de \u00e1cido nitroso e agitar novamente.<\/p>\n<p>4 &#8211; Deixar \u00e0 temperatura ambiente por cinco minutos.<\/p>\n<p>5 &#8211; Adicionar 5ml de dicloreto de etileno (ou dicloro-etileno) e agitar.<\/p>\n<p>6 &#8211; Se observar turbidez, centrifugar novamente<\/p>\n<p>7 &#8211; <b>Uma cor p\u00farpura na parte superior indica rea\u00e7\u00e3o positiva.<\/b> Com<br \/>\na urina normal n\u00e3o se observa esta colora\u00e7\u00e3o, por\u00e9m, \u00e9 poss\u00edvel observar<br \/>\numa cor amarelada.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>Tabela II &#8211; Condi\u00e7\u00f5es de rea\u00e7\u00e3o para prova quantitativa para 5-HIAA.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<table width=\"748\" cellspacing=\"1\" cellpadding=\"5\" border=\"\">\n<tbody>\n<tr>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\"><b><i>Condi\u00e7\u00e3o<\/i><\/b><\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\"><b><i><\/i><\/b><i><\/i><i><b>Ensaio espectrofotom\u00e9trico<\/b><\/i><\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\"><b><i><\/i><\/b><i><\/i><i><b>Ensaio HPLC.<\/b><\/i><\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">Temperatura<\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">37 e 80-100<sup>o<\/sup><\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">Ambiente.<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">PH<\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">7,0<\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\"><b><\/b><b>&#8212;<\/b><\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">Tempo de rea\u00e7\u00e3o<\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">3 a 5 minutos<\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">10minutos<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">Volume de amostra<\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">5ml (2ml de extrator)<\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">100<span style=\"font-family: Symbol;\">m<\/span><\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">Fra\u00e7\u00e3o de volume de amostra<\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">0,54 (para extra\u00e7\u00e3o)<\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">0,022 (para extra\u00e7\u00e3o)<\/p>\n<p>&nbsp;<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">Concentra\u00e7\u00e3o final dos reativos<\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">1-nitroso-2-naftol 1,55mmol\/l<\/p>\n<p>HNO<sub>3<\/sub> 3,5mmol\/l<\/p>\n<p>H<sub>2<\/sub>SO<sub>4<\/sub> 028mol\/l<\/p>\n<p>2-mercaptoetanol 193mmol\/l<\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">&nbsp;<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">Linearidade<\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">30mg\/l<\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">3<span style=\"font-family: Symbol;\">m<\/span> g (injetados)<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">Precis\u00e3o (CV)<\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">4%<\/td>\n<td width=\"33%\" valign=\"TOP\">5%<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><a name=\"_Toc446237489\"><\/a>Prova Quantitativa<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>Equipamentos: espcctrofot\u00f4metro com divis\u00f5es de bandas <span style=\"font-family: Symbol;\">\u00a3<\/span><br \/>\n10nm; estufa de Pasteur (37<sup>o <\/sup>C) e um agitador mec\u00e2nico.<\/p>\n<p>1 &#8211; Medir o volume de urina da amostra de urina de 24 horas, em<br \/>\nmililitros (ml).<\/p>\n<p>2 &#8211; Colocar 5ml de urina em tubo de centr\u00edfuga de 50ml com tampa de<br \/>\nvidro.<\/p>\n<p>3 &#8211; Colocar 5ml de \u00e1gua deionizada em um tubo de centr\u00edfuga com tampa de<br \/>\nvidro, para usar como branco.<\/p>\n<p>4 &#8211; Colocar 5ml da solu\u00e7\u00e3o estoque de 10ml\/l em tubo de centr\u00edfuga, para<br \/>\nusa como padr\u00e3o.<\/p>\n<p>5 &#8211; Adicionar a todos os tubos 5ml de Hcl 1mol\/l, cloreto de s\u00f3dio em<br \/>\nsolu\u00e7\u00e3o saturada(aproximadamente 4g) e 25ml de \u00e9ter.<\/p>\n<p>6 &#8211; Agitar durante 5 minutos e centrifugar.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><b>7 &#8211; <\/b>Transferir 20ml dos extratos et\u00e9reos a tubos de centr\u00edfuga de<br \/>\n50ml com tampa de vidro.<\/p>\n<p>8 &#8211; Adicionar 4ml de buffer de fosfato (tamp\u00e3o de fosfato). Agitar<br \/>\ndurante 5 minutos e centrifugar.<\/p>\n<p>9 &#8211; Aspirar a camada superior de \u00e9ter.<\/p>\n<p>10 &#8211; Transferir al\u00edquotas de 2ml da camada aquosa a tubos de ensaio de<br \/>\n13X100mm., tomando o cuidado de n\u00e3o carrear solu\u00e7\u00e3o et\u00e9rea. N\u00e3o descartar<br \/>\na solu\u00e7\u00e3o aquosa restante at\u00e9 finalizar as an\u00e1lises.<\/p>\n<p>11 &#8211; Adicionar 0,5ml de 1-nitroso-2-naftol a todos os tubos e misturar.<\/p>\n<p>12 &#8211; Adicionar 1ml de \u00e1cido nitroso a cada tubo e misturar.<\/p>\n<p>13 &#8211; Incubar todos os tubos \u00e0 37<sup>o <\/sup>C durante 5 minutos<\/p>\n<p>14 &#8211; Adicionar 0,2ml de 2-mercaptoetanol a todos os tubos e misturar bem.<\/p>\n<p>15 &#8211; Incubar todos os tubos em banho-maria \u00e0 85-100<sup>o<\/sup>C, durante<br \/>\n5 minutos.<\/p>\n<p>16 &#8211; Esfriar os tubos \u00e0 temperatura ambiente.<\/p>\n<p>17 &#8211; adicionar 5,0ml de acetato de etila a todos os tubos. Tampar com<br \/>\ntampa de borracha e agitar energicamente durante meio minuto. Deixar<br \/>\nseparar as fases.<\/p>\n<p>18 &#8211; Aspirar a camada org\u00e2nica (camada superior).<\/p>\n<p>19 &#8211; Ler a absorb\u00e2ncia (A) a 590nm da camada inferior dos padr\u00f5es e<br \/>\namostras desconhecidas contra o branco.<\/p>\n<p>C\u00e1lculos:<\/p>\n<p><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" src=\"Image373.gif\" width=\"612\" height=\"55\"\/><b> <\/b><\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>Notas:<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>1 &#8211; Na prova qualitativa se observa uma cor p\u00farpura para n\u00edveis de 5-HIAA<br \/>\nde apenas 30 a 40mg\/l. Para n\u00edveis mais elevados a cor \u00e9 mais intensa,<br \/>\nchegando a quase negro para concentra\u00e7\u00f5es superiores \u00e0 300mg\/l.<\/p>\n<p>2 &#8211; A forma\u00e7\u00e3o de cor na prova qualitativa pode ser inibida por condi\u00e7\u00f5es<br \/>\nque provocam a excre\u00e7\u00e3o de grande quantidades de ceto\u00e1cidos.<\/p>\n<p>3 &#8211; A <b><i>p<\/i><\/b>-hidroxiacetanilida reage em forma similar ao<br \/>\n5-HIAA, por\u00e9m pode ser encontrado na urina somente ap\u00f3s a administra\u00e7\u00e3o de<br \/>\nacetanilida e de drogas pertencentes ao mesmo grupo.<\/p>\n<p>4 &#8211; A forma\u00e7\u00e3o de uma intensa colora\u00e7\u00e3o roxa no procedimento 11 da<br \/>\ndetermina\u00e7\u00e3o quantitativa pode indicar a presen\u00e7a de metab\u00f3litos do<br \/>\nguaiacolato de glicerila presente em antituss\u00edvegos e drogas relacionadas.<\/p>\n<p>5 &#8211; Se absorb\u00e2ncia (A) da amostra desconhecida for tr\u00eas vezes maior que<br \/>\nda solu\u00e7\u00e3o padr\u00e3o, deve-se repetir o desenvolvimento da cor com 0,2ml de<br \/>\nextrato em tamp\u00e3o fosfato do procedimento 10. Adicionar 1,8ml deste tamp\u00e3o<br \/>\n\u00e0 amostra e continuar com a an\u00e1lise. Para realizar o c\u00e1lculo, multiplicar<br \/>\no valor obtido mediante a f\u00f3rmula por 10, para corrigir a dilui\u00e7\u00e3o.<\/p>\n<p>6 &#8211; Tem sido encontradas inter\u00eancias negativas devidas \u00e0 presen\u00e7a de<br \/>\nfenotizainas e \u00e1cido homogent\u00edsico no m\u00e9todo do 1-nitroso-2-naftol<br \/>\nmodificado. Estes compostos n\u00e3o tem sido analisados debaixo das mesmas<br \/>\ncondi\u00e7\u00f5es aqui apresentadas.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><a name=\"_Toc446237490\"><\/a>DETERMINA\u00c7\u00c3O DO 5-HIAA POR HPLC.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><a name=\"_Toc446237491\"><\/a>Princ\u00edpio<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>O \u00e1cido 5-hidroxiindolac\u00e9tico junto com o padr\u00e3o interno misturado se<br \/>\npurifica mediante colunas de extra\u00e7\u00e3o <b>C<sub>18<\/sub>. <\/b>A fran\u00e7\u00e3o<br \/>\nque contem o 5-HIAA e o padr\u00e3o interno se injeta em um sistema de HPLC. O<br \/>\n\u00e1dico e o padr\u00e3o interno se separam e s\u00e3o determinados posteriormente com<br \/>\num detetor eletroqu\u00edmico<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><a name=\"_Toc446237492\"><\/a>Reativos<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><b>\u00c1gua deionizada, destilada<\/b>. Deve ser empregada para extra\u00e7\u00e3o de<br \/>\ntodos os reativos.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>Colunas de extra\u00e7\u00e3o C<sub>18<\/sub>.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><b>\u00c1cido ac\u00e9tico (6mol\/l).<\/b> Diluir 34,5ml de \u00e1cido ac\u00e9tico glacial em<br \/>\n100ml de \u00e1gua. Est\u00e1vel por um ano \u00e0 temperatura ambiente.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><b>Solu\u00e7\u00e3o de hidr\u00f3xido de am\u00f4nio (6mol\/l)<\/b>. Diluir 39,7ml de<br \/>\nhidr\u00f3xido de am\u00f4nio concentrado em 100ml de \u00e1gua. Est\u00e1vel por um m\u00eas \u00e0<br \/>\ntemperatura ambiente.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><b>Solu\u00e7\u00e3o de buffer de acetato (0,1mol\/l, pH 5,0).<\/b> Adicionar 1,5ml<br \/>\nde \u00e1cido ac\u00e9tico 6M e 1,3g de acetato de s\u00f3dio em bal\u00e3o volum\u00e9trico de<br \/>\n250ml e completar com \u00e1gua. Est\u00e1vel por um ano \u00e0 temperatura ambiente.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><b>Solu\u00e7\u00e3o estoque de \u00e1cido 5-hidroxiindolac\u00e9tico 0,5g\/l (2,62mmol\/l). <\/b>Dissolver<br \/>\n25mg de 5-HIAA em 40ml de \u00e1gua. Ajustar o pH a menos de 3,0 com Hcl conc.<br \/>\nCompletar o volume para 50ml. Est\u00e1vel por um m\u00eas \u00e0 4<sup>o<\/sup>C.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><b>Solu\u00e7\u00e3o padr\u00e3o de \u00c1cido 5-Hidroxiindolac\u00e9tico, 5mg\/l (0,0262mmol\/l).<\/b><br \/>\nDiluir a solu\u00e7\u00e3o estoque \u00e0 1:100 com \u00e1gua destilada e deionizada. Preparar<br \/>\na cada dia.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><b>Solu\u00e7\u00e3o estoque de padr\u00e3o interno, 0,5g\/l (2,44mmol\/l).<\/b> Dissolver<br \/>\n12,5mg de <b>\u00e1cido 5-hidroxi-3-indolpropi\u00f4nico (5-HIPA)<\/b> em 20ml de<br \/>\n\u00e1gua. Ajustar o pH para baixo de 3,o com HCl concentrado. Completar o<br \/>\nvolume para 25ml. Est\u00e1vel por um m\u00eas \u00e0 4<sup>o<\/sup>C.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><b>Solu\u00e7\u00e3o padr\u00e3o interno de trabalho, a 5mg\/l (0,244mmol\/l).<\/b> Diluir<br \/>\na solu\u00e7\u00e3o estoque de 5-HIPA para 1:100<b> <\/b>em \u00e1gua destilada. Preparar<br \/>\na cada dia.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><b>Fase m\u00f3vel usada em HPLC.<\/b> Adicionar os seguintes reagentes a um<br \/>\nbecher ou erlenmeyer de dois litros, contendo <b>1760ml de \u00e1gua<br \/>\ndestilada: 50,7ml de hidr\u00f3xido de am\u00f4nio concentrado; 64,7ml de \u00e1cido<br \/>\nac\u00e9tico glacial e 0,2g de EDTA diss\u00f3dico.<\/b> Ajustar o pH para 5,1 com<br \/>\n\u00e1cido ac\u00e9tico 6M ou NH<sub>4<\/sub>OH 6M. Adicionar imediatamente 325ml de<br \/>\n<b>metanol<\/b>. Misturar e filtrar. Desgaseificar a fase movel antes de<br \/>\nusar. Preparar \u00e0 cada dia.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><a name=\"_Toc446237493\"><\/a>Ensaio<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>Equipamento: cromatografo de fase gasosa, detetor eletroqu\u00edmico,<br \/>\nregistrador para papel.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>As colunas de extra\u00e7\u00e3o <b>C<sub>18<\/sub><\/b> <b>Baker<\/b> devem ser<br \/>\ncondicionadas antes de se adicionar as amostras. Devem ser lavadas com o<br \/>\ndobro do volume da coluna com metanol qualidade HPLC, debaixo de v\u00e1cuo. A<br \/>\nmedica em que o n\u00edvel do metanol se aproxima da parte superior do patamar,<br \/>\ndeve ser interrompido o v\u00e1cuo. Imediatamente ap\u00f3s a lavagem com metanol,<br \/>\nse adiciona \u00e1gua deionizada em volume igual. O v\u00e1cuo deve ser<br \/>\ndesconecatado logo ap\u00f3s a aspira\u00e7\u00e3o total da \u00e1gua atrav\u00e9s da coluna. Se a<br \/>\ncoluna secar antes da introdu\u00e7\u00e3o da amostra, deve ser recondicionada<br \/>\nnovamente.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>1 &#8211; Pipertar, em tubo de ensaio de 13X100mm, 3,9ml, 3,7ml e 3,5ml de<br \/>\ntamp\u00e3o de acetato nos tubos rotulados de padr\u00e3o 1,2 e 3.<\/p>\n<p>2 &#8211; Pipetar 200, 400 e 600<span style=\"font-family: Symbol;\">m<\/span> l do padr\u00e3o de<br \/>\ntrabalho do 5-HIAA nos tubos marcados 1;2 e 3, respectivamente.<\/p>\n<p>3 &#8211; Pipetar 100<span style=\"font-family: Symbol;\">m<\/span> l de urina em tubos<br \/>\nmarcados como controle.<\/p>\n<p>4 &#8211; Pipetar 4ml de tamp\u00e3o acetato de s\u00f3dio nos tubos controle e de<br \/>\namostra.<\/p>\n<p>5 &#8211; Pipetar 400<span style=\"font-family: Symbol;\">m<\/span> l de padr\u00e3o interno de<br \/>\ntrabalho do 5-HIPA em todos os tubos.<\/p>\n<p>6 &#8211; Lavar as colunas de extra\u00e7\u00e3o C<sub>18<\/sub> Baker com 3ml de<br \/>\nmetanol e 3ml de \u00e1gua.<\/p>\n<p>7 &#8211; Adicionar a amostra adequada a coluna de extra\u00e7\u00e3o e recolher o<br \/>\nefluente em tubos de ensaio.<\/p>\n<p>8 &#8211; Adicionar 3ml da fase m\u00f3vel as colunas, 1ml por vez e recolher os<br \/>\nefluentes em tubos de ensaio.<\/p>\n<p>9 &#8211; Misturar os efluentes dos passos 7 e 8, agitar em um &#8220;vortex&#8221;e<br \/>\ninjetar 50<span style=\"font-family: Symbol;\">m<\/span> l dos padr\u00f5es, controles e<br \/>\namostras desconhecidas ao sistema cromatogr\u00e1fico.<\/p>\n<p>10 &#8211; Condic\u00f5es experimentais para HPLC:<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<table width=\"748\" cellspacing=\"1\" cellpadding=\"5\" border=\"\">\n<tbody>\n<tr>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\"><b>Potencial do detetor eletroqu\u00edmico<\/b><\/td>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\"><b><\/b><b>0,50V<\/b><\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\"><b><\/b><b>Sensibilidade do detetor<\/b><\/td>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\"><b><\/b><b>20nA\/V<\/b><\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\"><b><\/b><b>Velocidade do fluxo<\/b><\/td>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\"><b><\/b><b>0,9ml\/minuto<\/b><\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\"><b><\/b><b>Velocidade do Registro<\/b><\/td>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\"><b><\/b><b>0,25cm\/minuto<\/b><\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\"><b><\/b><b>Tempo de reten\u00e7\u00e3o<\/b><\/td>\n<td width=\"50%\" valign=\"TOP\">4 a 5 minutos para 5-HIAA<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><b>7 a 8 minutos para 5-HIPA<\/b><\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>C\u00e1lculos:<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>A quantidade de 5-HIAA nos tubos padr\u00f5es 1;2 e 3 s\u00e3o representados pela<br \/>\nrela\u00e7\u00e3o das alturas dos picos de 5-HIAA\/5-HIPA para se estabelecer uma<br \/>\ncurva de calibra\u00e7\u00e3o por m\u00e9todo de ajuste alg\u00e9brico da reta. A quantidade<br \/>\nde 5-HIAA (em microgramos) presente em 100<span style=\"font-family: Symbol;\">m<\/span> l<br \/>\nde urina se obtem a partir do ajuste alg\u00e9brico inicial. O resultado final<br \/>\nexpresso em mg\/24h se calcula mediante a equa\u00e7\u00e3o:<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><span style=\"font-family: Symbol;\">m<\/span> g de 5-HIAA X <u>VT ml\/24h<\/u> X <u>1mg<\/u><br \/>\n= mg de 5-HIAA\/24h.<\/p>\n<p>0,1ml 1000<span style=\"font-family: Symbol;\">m<\/span> g<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>De onde VT \u00e9 o volume total.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><a name=\"_Toc446237494\"><\/a>INTERVALO DE REFER\u00caNCIA<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><b>Prova qualitativa: <\/b>Negativa (menos de 30 a 40mg\/ml, 157 a 209<span style=\"font-family: Symbol;\">m<\/span> mol\/l).<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><b>Prova quantitativa: <\/b>1,8 a 6,0mg\/24h (9,4 a 31,4<span style=\"font-family: Symbol;\">m<\/span><br \/>\nmol\/24h). A excre\u00e7\u00e3o de 5-HIAA <b>independe<\/b> de idade, sexo, etnia,<br \/>\netc..<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p><a name=\"_Toc446430143\"><\/a>INTERPRETA\u00c7\u00c3O<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p>As an\u00e1lises de 5-HIAA s\u00e3o solicitadas para descartar a presen\u00e7a de<br \/>\ntumores carcin\u00f3ides. Este tipo de tumor \u00e9 um dos mais comuns que aparecem<br \/>\nno intestino delgado, originando-se das c\u00e9lulas de Kultschitzsky das<br \/>\ncristas de Lieberk\u00fchn. Tamb\u00e9m pode se apresentar no p\u00e2ncreas, ap\u00eandice<br \/>\nvermiforme, reto e ov\u00e1rio.<\/p>\n<p>As manifesta\u00e7\u00f5es cl\u00ednicas mais frequentes do tumor est\u00e3o associadas com a<br \/>\nobstru\u00e7\u00e3o intestinal ou perda de sangue retal. Raras vezes as<br \/>\nmanifesta\u00e7\u00f5es iniciais s\u00e3o associadas com a <b><i>s\u00edndrome carcin\u00f3ide<\/i><\/b>,<br \/>\nque em ordem de frequ\u00eancia s\u00e3o o enrigecimento, diarreia, insufici\u00eancia<br \/>\ncard\u00edaca severa e broncoconstri\u00e7\u00e3o (crise asmatiforme).<\/p>\n<p>Os tumores carcin\u00f3ides a muido formam met\u00e1stases no g\u00e2nglios linf\u00e1ticos<br \/>\nregionais e no f\u00edgado. A maior frequ\u00eancia das met\u00e1stases de g\u00e2nglios se<br \/>\nobserva nos carcin\u00f3ides de c\u00f3lon. Os sintomas da s\u00edndrome carcin\u00f3ide<br \/>\nnormalmente aparecem depois que o tumor formou met\u00e1stases no f\u00edgado. Se<br \/>\npensa atualmente que os sintomas desta s\u00edndrome se devem a quantidades<br \/>\nexcessivas de 5-HIAA que s\u00e3o secretadas pelo tumor. Em um estudo, a metade<br \/>\ndos pacientes com met\u00e1stase hep\u00e1tica apresentaram caracter\u00edsticas de<br \/>\ns\u00edndrome carcin\u00f3ide e n\u00edveis urin\u00e1rios elevados de 5-HIAA. Nenhum paciente<br \/>\nsem met\u00e1stase hep\u00e1tica de um tumor carcin\u00f3ide de c\u00f3lon apresentava n\u00edveis<br \/>\nelevados do 5-HIAA<\/p>\n<p>A excre\u00e7\u00e3o excessiva do 5-HIAA \u00e9 o indicador bioqu\u00edmico mais espec\u00edfico<br \/>\nde tumor carcin\u00f3ide. Se bem que os pacientes com estes tumores excretam de<br \/>\n5 a 50 vezes a quantidade normal de 5-HIAA, esta excre\u00e7\u00e3o \u00e9 vari\u00e1vel e a<br \/>\nmiudo requer medi\u00e7\u00f5es consecutivas para estabelecer o diagn\u00f3stico. Em caso<br \/>\nde n\u00edveis elevados lim\u00edtrofes de 5-HIAA, deve ser eliminado da dieta do<br \/>\npaciente os alimentos ricos em serotonina. A reserpina que estimula a<br \/>\nlibera\u00e7\u00e3o da serotonina de reseva pode causar eleva\u00e7\u00f5es falsa do 5-HIAA<\/p>\n<p>Podem ser encontrados n\u00edveis levemente elevados de 5-HIAA em urina de<br \/>\noutras enfermidades do trato gastrointestinal, como no <b>espru cel\u00edaco,<br \/>\nespru tropical<\/b> e enfermidade de <b>Whipple<\/b>, assim como no<br \/>\ncarcinoma de c\u00e9lunas de avena dos br\u00f4nquios. Se tem sugerido que a<br \/>\ndiscreta eleva\u00e7\u00e3o dos n\u00edveis urin\u00e1rios boservadas em pacientes com <b>espru<br \/>\nn\u00e3o tropical<\/b> s\u00e3o atribuidas aso 5-HIAA liberado por c\u00e9lulas do trato<br \/>\ngastrointestinal como resultado de uma motilidade intestinal alterada. Em<br \/>\n21 pacientes com espru n\u00e3o tropical foram encontrados n\u00edveis do 5-HIAA<br \/>\nentre 5,8 a 12mg\/24horas, com uma m\u00e9dia de 8,6mg\/24horas (o limite<br \/>\nsuperior normal neste estudo foi de 2 a 9ng\/24horas).<\/p>\n<p>Em pacientes com transtornos renais podem ser observados n\u00edveis baixos<br \/>\nfalsos do 5-HIAA.<\/p>\n<p>Em pacientes com dist\u00farbios psic\u00f3ticos, especialmente nas esquizofrenias,<br \/>\no 5-HIAA est\u00e1 elevado na urina. Constitui-se em importante ferramenta para<br \/>\nse determinar se uma psicose \u00e9 end\u00f3gena ou ex\u00f3gena.<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Caracter\u00edsticas qu\u00edmicas<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"footnotes":""},"categories":[78],"tags":[],"class_list":["post-67053","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-saude"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/antonini.ddns.net\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts\/67053","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/antonini.ddns.net\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/antonini.ddns.net\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/antonini.ddns.net\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/antonini.ddns.net\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fcomments&post=67053"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/antonini.ddns.net\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts\/67053\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/antonini.ddns.net\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fmedia&parent=67053"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/antonini.ddns.net\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fcategories&post=67053"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/antonini.ddns.net\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Ftags&post=67053"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}